Phospotungstic 酸

Phospotungstic 酸使用说明

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应用

Phosphotungstic 酸作为负染色剂，用于观察小型单独的亚细胞组织成分、病毒微粒、细菌鞭毛、菌毛、蛋白质分子等。这种技术使用的原则为，用电子密材料包围颗粒，使其电子透明，这样可以看到负像的几何结构。这种逆向对比效应最先由FARRANT(1954)在观察铁蛋白分子和HALL(1955)使用病毒微粒时发现。　

负染色的三个优点：

1) 该技术操作简便、迅速。

2) 电子对比度非常高，结构保存良好。

3) 只需要极少量的样品。

程序

制备电子显微镜负染色样品的方法通常有两种。

1) BRENNER et.al.(1959)。制备1或2%的染色溶液，用NaOH或HCI调整pH，与样品相符。

将少量样品与等量的染色剂混合，然后将少量混合物，或者用巴斯德吸液管滴于碳或塑胶镀膜的E.M.网格，或者用玻璃喷雾器喷在镀膜网格上。用过滤纸边缘除去多余液体，让网格干燥。

2) 将少量样品置于镀膜E.M.，在样品干燥前，用吸液管将少量染色剂溅泼在样品上。然后，用过滤纸除去多余液体，晾干网格。

对于上述各种方法，有必要实验样品浓度，以得到颗粒在图像上的满意分布。

该技术更多详细资料，见KAY(1965)和HAYAT (1972)。

参考文献

FARRANT J.L. (1954)铁蛋白的电子显微镜研究。生物化学与生物物理。Acta 13, 569.

HALL C.E. Particles.(1955) 染色病毒粒子的电子密度计量。J.生物化学与生物物理。细胞学 1, 1.

BRENNER S.和 R. W. HORNE (1959) 用于病毒高清晰度电子显微镜的负染色方法。生物化学与生物物理。Acta 34, 103.

KAY D.H. (1965)版，电子显微镜技术(第11章 R.W. Horne)' Blackwell科技出版社。

HAYAT M.A. Microscopy.(1972)版，电子生物学应用的原则与技术。Van Nostranol Princeton.

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