SPI-Mark™阳离子胶体金标液

问题解答

以下建议主要针对在使用阳离子胶体金过程中一些出现频率较高的问题。

无标记
金标液的pH值

标记程度可以根据用来稀释金标液的缓冲器的PH值来增加或减少。用户应当从PH2值开始，特征性最强，然后增加、减少PH值进行实验。

高盐含量
用来稀释金标液的缓冲器浓度可能影响标记。高盐含量能有效压缩离子场和金粒上的电荷，以减弱电荷吸引。用水稀释金标液到合适的PH值可以说明这个问题。稀释液应当含有1%的BSA，以减少非特征性背景。

孵化时间不足
对大多数强标记，高度稀释(如1/100)，并在潮湿室(如陪替氏培养皿)中放置一夜，可得到最佳效果。或者，孵化时间更短(如15分钟)，浓度更大(如1/10)。浓度越高，背景标记越强。

嵌入剂的选择
在电子显微镜下进行组织阳离子研究，疏水树脂如LR White和Unicryl用于免疫标记被证明是非常成功的。环氧树脂，部分由于它们需要完全脱水，标记效率较低，吸附非特定电荷到表面的几率更大。对光学显微镜研究来说，可使用装于载玻片的更厚的相同树脂。或者使用冰冻切片或石蜡切片。

强背景
pH值错误

pH值应适当减小，使背景降到非常弱，而特定标记仍然很强。一系列不同pH值的同步孵化可以得到最佳值。

残余的醛类
在0.1M的氯化铵中孵化30分钟，以除去残留在定影液中的醛类。此外，在阳离子金标液应用前，于1%的BSA中孵化，并在孵化稀释液中包含1%的BSA。

四氧化饿
在组织定影中使用四氧化饿，将把重金属带入组织，可能产生非特征性标记。最好避免使用四氧化饿。

铜网
封固EM切片时使用铜网，可能造成切片电荷分布的变化。此外，如果pH值较低，铜网将溶解。镍网或金网都要好得多。

疏水性电荷分布
切片上的非特征性电荷区域将吸引阳离子金粒。在孵化液中加入0.1%的Tween^® 20可以解决这一问题。

切片封固(LM)。
玻片表面可能吸附阳离子金粒。用1%的BSA可防止这一现象，孵化缓冲器中加入1%的BSA将降低这种背景来源。

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