使用LR White™，用于电子显微镜

伦敦树脂公司和SPI Supplies为您提供

"人类口腔上皮细胞，PTA染色"

将LR White™嵌入树脂用于专用电子显微镜时，程序和使用环氧树脂嵌入差不多。每个实验室都有自己的嵌入进程表，但我们在这里列出LR White的“典型”进程，作为使用指南。

定色：
不需要对正常定色进行任何改变，如果最终块只需要EM。

然而，如果需要良好的超微结构和各式各样的LM染色，我们发现最好使用刚解聚的多聚甲醛(3-4%)，加入磷酸缓冲液pH 7.2和2 w/v庶糖。戊二醛和Karnovsky戊二醛-甲醛混合物可能导致修补LM染色，有些染色剂不能染色或提供“主动错误信息”(如PAS)，而正常的福尔马林定色产生的EM超微结构让人无法接受。

对于双重LM/EM作用，应当避免使用四氧化锇，因为四氧化锇对许多LM染色有影响。但先用无水乙醇对1%的磷钨酸(w/v)进行脱水，将提高电子对比度，而不影响大多数LM染色。如果这些块只需要用于专用电子显微镜，则可以使用四氧化锇。

脱水：
嵌入LR White时，选择等级乙醇系列方法。丙酮用作树脂系统的自由基清除剂，因此固化过程中残余在组织中的丙酮将干扰聚合。因为这个原因，最好避免使用等级丙酮系列和2,2-二甲氧基丙烷(产生丙酮)。如果必须使用2,2-二甲氧基丙烷，我们建议推迟树脂渗透，或在渗透前用干燥酒精冲洗，以将丙酮对最终树脂的污染减到最小。

渗透：
LR White粘性极低，允许短时间渗透或用于大型标本，但不能同时用于两种情况。1立方毫米的动物组织将在3小时内充分渗透，如果保持在60°C，并更换4－6次LR White。然而，室温下整夜渗透，然后两次短时间更换树脂，通常更方便。LR White保存期限长，萃取率低，允许标本(也许是储备组织)在树脂中4°C下安全存储许多周，如果需要的话。大型块需要的渗透时间确实比小型块需要的渗透时间要长得多。

聚合：
与四氧化锇发生反应的组织不能用加速剂“冷固化”。这个过程放出大量热量，组织颜色深，导致热量局部积聚，这将使组织或组织周围产生局部问题。因此，我们要再一次提请注意：不要将加速剂用于已经用四氧化锇染色的组织。稍后用四氧化锇染色是完全可以的，但是必须在聚合发生以后。

如果稍后不用四氧化锇染色，则可使用LR White加速剂固化。同用于光学显微镜的固化块一样，我们建议在聚合过程中冷却模具，但不需要排除固化块表面的氧气。

锇化的标本应当用热固化，热固化可用于所有标本。这种情况下，在聚合过程中，限制树脂接触氧气非常重要。用胶囊式嵌入完成聚合最方便的方式是使用凝胶胶囊，装到溢满，用胶囊的另一半盖上。

如果需要扁平嵌入，用来切割定位，则必须盖住树脂表面，防止接触氧气。一种方便的方法是使用JB-4-型模具和卡盘，用于光学显微镜，并且在聚合后，可以将树脂块残余锯掉，循环使用模具。

聚合时间和温度对最终块的物理特征特别重要，比它对于固化不完全的环氧系统重要得多。

我们强烈建议温度为60°±2°，时间为20-24小时。有些烤箱不能将聚合温度控制得如此精确，如果块过于易碎，温度是首先需要检查的参数。

LR White渗透性能极好，能渗透和软化一些低密度聚乙烯胶囊。这使得胶囊软化和瓦解。此外，聚乙烯并不能防止氧气渗透，允许与大气中的氧气充分接触，使得块表面有抗氧化剂“粘性”。用凝胶胶囊（00型号与通用聚乙烯胶囊尺寸相似）能解决这两个问题，而且使得聚合过程中的密封，不仅更便宜，而且更容易。

与环氧树脂不同，这种树脂可从冷藏库中拿出来直接使用，而且毒性非常低，不管是单体还是聚合状态(见Proc.Roy.Mic.Soc.16,第4部分，第265-271页)。冷固化加速剂确实有中毒风险，应当避免接触皮肤和眼睛。

对于冷固化，每10 ml树脂，应当使用一滴加速剂，这将使得聚合在10-20分钟内发生。如果聚合比这更快，我们建议更加仔细地测量每一滴加速剂，或增加每一滴加速剂应用的树脂数量。

修整和切割：
同环氧树脂块一样，可用宝石匠锯、剃刀片或超微切片机上的玻璃刀具修整块。

切割，同样可用玻璃刀具或钻石刀具以与环氧树脂一样的方式进行。典型切割速度1 mm每秒比较合适。

切片染色：
所有普通切片染色都能对嵌入LR White树脂的组织进行效果不错的染色。避免在乙醇或甲醇中染色，因为这些溶剂将使树脂软化，并可能使切片从网格上移除。作为醋酸铀酰的替代物，1%的磷钨酸已经被证实为良好的通用染色剂，无论是作为整体染色剂，如前面提到的，还是用作切片染色剂。

在电子显微镜下：
电子密度的初步减少可能伴随树脂初步暴露于电子束。这被认为是表示损失了水，从刀槽或染色溶液中吸收了水分。同样地，并不会发生稀释，而且标本被固定于120KV电子束下3小时，没有损坏的明显迹象。

皮肤护理和安全产品：对于手部保护，应考虑使用皮肤防护脂222^®和皮肤调理剂212^®。

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