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SPI-Mark™胶体金试剂：协议

EM细胞表面抗原的预嵌入标记


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我们满怀诚意地将这些协议介绍给我们的顾客。它们适用于SPI-Mark™胶体金试剂，然而，如果使用不同牌子的试剂，我们不能推断将得到什么样的结果。

协议：
  1. 通过胰蛋白酶化作用从组织中分离细胞，或通过梯度离心分离血细胞。
  2. 依靠抗原敏感性，在0.1%SPI-Chem™ EM级戊二醛或2-4%SPI-Chem多聚甲醛的PBS溶液中，预先固定细胞。
  3. 在装有50mm氨基乙酸的PBS中冲洗3次，除去乙醛。
  4. 用PBS + 1% BSA + 10% 正常血清(二级抗体) + 0.1% 叠氮化钠，pH 7.4，阻滞细胞30 mm
  5. 用PBS + 1% BSA冲洗2次
  6. 与一级抗体在PBS + 1% BSA + 0.1% Tween 20 + 1% 正常血清(二级抗体)孵化缓冲液中孵化1小时。
  7. 用孵化缓冲液冲洗2次
  8. 与金标记二级抗体在孵化缓冲液中(步骤6)孵化1小时。
  9. 用PBS冲洗2次
  10. 在1%的戊二醛PBS溶液中固定15 mm
  11. 用蒸馏水或去离子水冲洗2次。


    12. 可选购银加强：
  12. 使用SPI-Chem 银加强套装银加强1-10分钟，增大金粒
  13. 用蒸馏水冲洗2次，停止加强，并除去银溶液。


    14. 嵌入：
  14. 旋转成小球，用酒精脱水
  15. 嵌入环氧树脂，用SPI-Chem SPI-Pon™ 812或丙烯酸树脂系统，如LR White™或Unicryl™或Lowicryl™“原物”或Lowicryl Monostep。
  16. EM或LM切片和染色
参考文献
  1. C Ferrari, et al (1989) “在悬浮细胞和组织切片上进行细胞表面抗原的预嵌入免疫金染色” Hayat MA，胶体金，第二卷 (Ch 16)

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Sunday May 20, 2012
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