SPI-Mark™银加强套装

使用说明与产品信息

用于光学显微镜和电子显微镜的银加强套装
SPI-Mark银加强套装，是一种对光学显微镜观察的免疫金标记样品进行加强的使用简单而灵敏的方法。它依赖于在显影剂存在的情况下，用金标记减少溶液中的银，金标记粘附在装裱于支持载玻片或盖玻片的细胞和组织的蛋白质/抗体/DNA上。它也能用于在培养器皿中制备和处理的细胞单层，在显微镜下直接观察。

SPI-Mark 套装使用简易、灵敏性好、对比度高。溶液成分经仔细挑选，在显影过程中容易控制，背景最弱。由于它对光相对不敏感，因而能在显微镜普通光照下监控载玻片。载玻片/样品在显影后不需要固定，染色是永久性的，载玻片能以普通方式复染色。显影时pH值为7.4，这样可以将使用别的加强方法可能遇到的困难减到最小。如果pH非常低，可能导致标记蛋白质从样品中被萃取出来。

程序
1. 将用于光学显微镜的适当SPI-Mark免疫金试剂标记样品。推荐使用1nm和5nm的SPI-Mark金标液用于LM标本。5nm金标液能很好地特异性标记脱蜡石蜡切片、树脂切片和冰冻切片。此外，也可以标记整个细胞和涂片。SPI-Mark 1nm金标液标记强度更高。例如，标记整个细胞，需要穿过细胞膜时尤其如此。而且，1nm金标液与其它尺寸更大的金标液相比，它对冰冻切片和脱蜡切片渗透更深入。

2. 用去离子水或蒸馏水彻底冲洗样品。单个的载玻片可单独处理，用喷射的水连续冲洗2分钟。成批的载玻片可在玻璃容器中冲洗，更换几次(如5次)水。如果需要的话，可在用水彻底冲洗后，银加强前，将载玻片在4°C下干燥存储几个星期。

3. 干燥样品周围区域。首先让银套装达到室温，充分摇动瓶子，然后将3滴引发剂和3滴加强剂混合于干净的塑胶管或玻璃管。将溶液滴至样品。可在显微镜载玻片上连续监控这个过程，但是应防止长时间的高强度照明。

4. 金标位上银沉淀的产生取决于温度。20°C时，5nm金标液加强所需要时间约为10-15分钟。1nm金标液，典型加强时间为20分钟。温度越低，所需时间越长；温度越高，所需时间越短。溶液配制使用户易于控制时间。特异性染色已完成，而背景仍然很弱的情况下，应停止反应。在自来水下冲洗1-2分钟，即能使反应停止。如果对在细胞内标记的整个细胞进行加强，可能需要更加彻底的冲洗，以除去细胞上的所有残余显影剂。不需要固定。溶液中银减少，即能观察到样品颜色变化。特异性标记位点颜色变化：无色-浅棕色-深棕色-黑色。如果需要的话，可使用刚混合的溶液继续该程序。

对样品以普通方式进行复染色。装裱并在光学显微镜下观察。

测试条
与套装一起提供的还有一包测试条。测试条经连续稀释的金标液点印迹。连续稀释的金标液中蛋白质含量连续减少。五个金标液点所含蛋白质分别为10ng、1ng、100pg、10pg和 1pg。加入5-10滴引发剂和加强剂，混合于管中(注意使用前，银套装应达到室温，瓶子应当充分摇动)，即可测试套装的灵敏度。点颜色将有一系列变化：粉红或无色-黄-橙-浅棕-深棕-黑。所有5个点最终都将染色(约 20-30 分钟)。测试条用于测试套装长期存放后的稳定性。SPI Supplies提供更多测试条。

储存
虽然加强套装在孵化过程中对光相对不敏感，它还是应当在4°C下阴暗处存储。如果存储适当，试剂能在使用前一直保持稳定。在0°C下存储，能延长保存期限。我们建议对存储一段时间未使用的套装，用所提供的测试条进行测试。

银加强套装印迹
SPI-Mark银加强套装使用简单，是对固体支持物上的免疫金标记抗原进行加强的灵敏方法。它依赖于显影剂存在的情况下，溶液中的银被金标记减少，以直接用眼观察。金标记粘附于装裱在固体物上的蛋白质/抗体/核酸。

虽然加强套装在孵化过程中，对光相对不敏感，它还是应当在4°C下阴暗处存储。

套装经特别配方，使用方便，灵敏性好，对比度高。溶液成分经仔细挑选，在显影过程中容易控制，背景最弱。由于它对光相对不敏感，因而显影过程中能在普通房间照明下对加强进行监控。样品在显影后不需要固定，但应当在自来水下彻底冲洗，除去所有残余银溶液。显影时pH值为7.4，这样可以将使用别的加强方法可能遇到的困难减到最小。如果pH非常低，可能导致标记蛋白质从样品中被萃取出来。

程序
1. 用生物化学应用的适当SPI-Mark 免疫金试剂标记样品。固定于固体支持物上的抗原，推荐使用1nm和20nm的SPI-Mark金标液。20nm 金标液在用银加强前，可见度就较高。SPI-Mark的1nm金标液，由于粘附于抗原的金粒数目非常大，标记强度非常高。

2. 用SPI-Mark 金标液标记后，固体支持物应当在去离子水或蒸馏水中彻底冲洗。在所有情况下，都应当使用非金属实验室器具。避免使用金属支持物和镊子，因为金属将使银从溶液中沉淀析出。塑胶托盘是孵化的理想器具。我们推荐使用SPI Supplies提供的PTFE镀膜或镀金镊子。我们在这一点上要补充警告：您必须使用SPI Supplies提供的镀金镊子，而不能用其它来源所称的“镀金”，那些镀金实际上只是“闪金光”，一层薄得多的镀膜，并不能提供镀金镊子的厚镀膜那样的保护。

3. 使用前，首先使SPI-Mark银加强套装达到室温，充分摇动瓶子。混合等量的引发剂和加强剂，在塑胶托盘中覆盖固体支持物表面3-4mm。可在普通房间照明条件下监控显影过程。避免将反应靠近强照明或直接暴露于阳光下。

4. 金标记位上银沉淀的产生取决于温度。20°C下，20nm金标液典型加强时间约为15-20分钟。 1nm金标液的典型加强时间为30-40分钟。温度越低，所需时间越长；温度越高，所需时间越短。溶液配方使用户容易控制加强时间。特异性染色完成，背景仍然很弱时，应停止加强。几次更换自来水，冲洗2-3分钟，即可停止反应。不需要固定。银从溶液中减少时，即可观察到固体支持物上的颜色变化。特异性标记位上的颜色变化：无色-黄-橙-浅棕-深棕-黑。如果需要的话，可使用刚混合的溶液继续该程序。用水彻底冲洗后，将固定物在空气中干燥。

测试条
与套装一起提供的还有一包测试条。测试条经连续稀释的金标液点印迹。连续稀释的金标液中的蛋白质含量连续减少。5个点上的金标液所含蛋白质分别为：10ng、1ng、100pg、10pg和1pg。加入5-10滴引发剂和加强剂，混合于管中(注意，使用前，首先应当使银套装达到室温，充分摇动瓶子)，即可测试套装灵敏度。点颜色将变化：粉红或无色-黄-橙-浅棕-深棕-黑。所有5个点最终将都被染色(约20-30 分钟)。测试条用来鉴定长期存放后的套装的稳定性。SPI Supplies提供更多测试条。

储存
不使用时，溶液应存储于4°C。如果套装长期不使用，存储于-20°C，可延长保存期限。如果冷冻套装已经过了使用日期，也许仍然可以使用，但最好事先用提供的测试条进行测试。

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