SPI Supplies®云母片和云母盘
云母条和玻璃以及石英片的硅烷化
许多草案似乎都是用来使基片具有“粘性”而粘附细胞。最关键的“秘密”因素是3氨丙基三乙氧基硅烷(3APTS)。
- 把基片浸入2%的3APT的丙酮溶液中一分钟进行镀膜。基片必须尽量清洁,可以事先把它浸在20%的盐酸的乙醇溶液中进行清洁。或者把它浸入20%的硫酸水溶液中。这样做的目的是使其表面具有吸水性。如果想进一步清洁的话,可以将其浸入无水丙酮中两小时,将丙酮置于分子筛上24-36小时即可得到无水丙酮。
- 制备2%的3APTS的无水丙酮溶液(见上)。把基片放在适当的玻璃或聚丙烯容器中。容器装满2%的该溶液,在50癈下放置24小时,或者4%的溶液放置12小时。3APTS的硅烷化处理使基片镀上一层氨基膜。
- 把基片浸入100%的丙酮中一分钟,除去3APTS,然后
- 把基片浸入清水中一分钟。
- 重复步骤3)和4),并搅动。
- 在无尘环境中风干。
这样,镀膜基片应该有粘性,可以使用了。如果浸入4°C的蒸馏水,则可以储存5天。
细胞粘附的典型草案:
用无水丙酮冲洗基片,然后浸于1%的EM级戊二醛中一小时。然后置于4°C的蒸馏水中。这时候基片表面应该镀有乙醛基,乙醛基与氨基在细胞(或细胞部分)表面共价结合。如果细胞(或细胞部分)必须在(戊二醛中)粘附以前固定,那么1%的戊二醛可以省掉。固定的生物材料中表面的乙醛基将粘附基片上的氨基。
上述信息,是我们对收到的几个研究者的对制备基片的最佳方法的不同观点的整合。我们强烈建议参考以下书目。
附参考书目:
- Angerer, L.M.和 Angerer, R.C. Localization of mRNAs by in situ
hybridization. Functional Organization of the Nucleus: a Laboratory Guide.
Methods in Cell Biology, 35卷, (B.A. Hamalko 和 S.C.R. Elgin编), pp. 37 - 71(1991).
- J. P. Robinson, P.Dunnill,和 M. D. Lilly, Biochim. Biophys.
Acta 242, 659-661, (1971)
- M. Buechi 和 T. Baechi, J.Cell Biol. 83, 338-347, 1979.

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Monday February 06, 2012
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